Efeito dos anticoagulantes na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de equinos

Abstract

A biologia molecular permitiu muitos progressos na medicina veterinária e a fonte de DNA mais frequentemente usada é o sangue, o qual pode ser coletado com diferentes anticoagulantes, apesar do EDTA ser o mais utilizado. A fim de fornecer dados sobre a viabilidade da amostra caso seja enviado com outros anticoagulantes, o presente estudo tem o objetivo de analisar a influência do tipo de anticoagulante, tempo de armazenamento e tipo de armazenamento na amplificação por PCR de DNA extraído de sangue equino. Amostras de sangue venoso foram colhidas em tubos contendo EDTA, Heparina de Lítio, Citrato de Sódio e Fluoreto de Sódio e foram submetidas a diferentes condições de tempo e armazenamento. As extrações de DNA foram realizadas utilizando kit comercial DNeasy Blood & Tissue da QIAGEN® e os produtos foram quantificados pelo espectrofotômetro Nanodrop ND1000 Thermo® e avaliados em gel agarose 0,8% por eletroforese. Foram realizados ensaios de PCR convencional e os fragmentos foram analisados em gel agarose 2,0%. O DNA extraído das amostras de sangue usando os quatro anticoagulantes expressou qualidade adequada do produto de PCR com o primer ASB 23 e nenhum apresentou inibição na PCR frente às diferentes condições. O tipo de anticoagulante e armazenamento que mais conferiu preservação da amostra foi o EDTA sob congelamento a -20ºC.